Contagem De Bactérias

Contando Microrganismos Em Placas

A contagem de microrganismos em placa é uma técnica comumente usada para contar grupos microbianos em geral, como por exemplo os aeróbios mesófilos e psicrófilos, bolores e leveduras, etc. É também utilizado para contagem de gêneros e espécies específicas (com auxílio de meio de cultura específico para cada gênero), há exemplos como contagem de Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Vibrio parahaemolyticus e outros.

O método de contagem total em placas se baseia na premissa de que cada colônia microbiana formada é originária de uma célula ou de uma unidade formadora de colônia presente em uma amostra do alimento. Variando o tipo de meio de cultura (enriquecido, seletivo, seletivo diferencial) e as condições de incubação (temperatura e atmosfera) é possível selecionar o grupo, gênero ou espécie que se deseja contar.

DILUIÇÃO E PLAQUEAMENTO EM SUPERFÍCIE

Para obtenção dasuspensão inicial (1/10), procede-se do seguinte modo:

Em tubo estéril adicionar um volume, que pode ser de 10 mL do diluente escolhido (solução salina a 0,85% ou solução salina peptonada). Após, retirar assepticamente com alças microbiológicas estéreis, colônias da amostra, colocando-as no tubo com a solução salina e homogeneizar em vortex.

Preparar as diluições necessárias, 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, a partir da suspensão inicial da amostra preparada anteriormente, transferindo 1mL da suspensão inicial para tubos com 9ml de solução salina peptonada e homogeneizar.

Distribuir 100 uL de cada diluição no centro de placas de Petri com meio ágar estéril e espalhar uniformemente com auxílio de alça de drigalski estéril.

Incubar as placas invertidas, respeitando a temperatura e tempo de crescimento de cada micro-organismo.

Para plaquear a placa e deixa-la pronta para contagem, a metodologia utilizada para a contagem de colônia em placas é através do método de espalhamento em placa.

Serão consideradas significativas a contagens das diluições que apresentarem entre 30 e 300 colônias. Para calcular o número de unidade formadora de colônia (UFC) por grama do produto, multiplicar o número significativo encontrado, pelo fator de diluição correspondente, lembrando que, como foram plaqueados 100 uL de cada tubo o valor de colônias contado deve ser multiplicado por 10, isso não seria necessário se fossem plaqueados 1 mL de cada tubo, porém a placa não absorveria direito e dificultaria a contagem de colônias.

Exemplo de expressão de resultado:

Número de colônias contadas na diluição de 10-3 = 250

Resultados: 2,5 × 105 UFC/grama.

REFERÊNCIA:

- Microbiologia Básica - Irineide Teixeira de Carvalho (UFRPE/CODAI 2010);