Preparação dos Experimentos Microbiológicos

AGENTES FÍSICOS E QUÍMICOS UTILIZADOS

Dentre os agentes físicos encontramos:

Calor úmido: técnica muito utilizada para esterilização de todo material, com algumas exceções, sendo recomendado o uso de autoclave a 121°C por 15 minutos.

Radiação UV: o efeito bactericida muito conhecido da luz solar deve-se na realidade às irradiações ultravioletas que é um desnaturante proteico.

Dentre os agentes químicos encontraremos a dissolução dos lipídios da membrana celular (através de detergentes por exemplo) e alterações irreversíveis das proteínas (uso de desnaturalizantes, quelantes, etc).

BIOFILMES MICROBIANOS

Assim como na natureza e nos alimentos, os microrganismos crescem em comunidade, que quando aderem uma superfície formam uma película invisível a olho nu chamada de biofilme. As células microbianas que formam esse biofilme estão envolvidas por uma matriz polimérica, se caso estes microrganismos forem patogênicos, tal como bactérias degradadoras, os alimentos podem ser contaminados.

Como se formam esses biofilmes?

Em qualquer superfície, para a formação do biofilme, os nutrientes dos alimentos são adsorvidos na superfície formando um filme condicionante, depois, os microrganismos aderem a esta superfície, multiplicando-se e fazendo pequenas colônias.

PREPARANDO ÁLCOOL A 70%

O álcool é um produto hidratado, porém tem um poder de evaporação

muito rápido. O poder bactericida pode ser melhorado se aumentarmos seu tempo de contato com as superfícies. O álcool a 93,8% (álcool comercial) tem um maior poder de volatilização, portanto para melhor ação bactericida devemos diluir o álcool a 70%.

Logo, 100ml de álcool é constituído de 938ml de álcool e 62ml de água.

Com isso podemos fazer a seguinte relação:

1000ml..........................92,8%

X..............................70%

X = 754,31ml de álcool

1000 - 754,31 = 245,69

755ml de álcool + 245ml de água equivale ao álcool a 70%

O álcool diluído a 70% permite um maior tempo de contato com o microrganismo e por isso possui maior poder bactericida.

PREPARO DO MATERIAL PARA USO EM ANÁLISES MICROBIOLÓGICAS DE ALIMENTOS

Todos os materiais que serão utilizados em análise microbiológica de alimento devem ser preparados de maneira que assegure total limpeza, esterilidade e isentos de resíduos químicos e orgânicos no momento da análise.

A esterilização de vidrarias deve ser feita em estufa, porque ao final da esterilização o material encontra-se completamente seco. Pipetas com capacidade menor que 1,0ml nunca devem ser esterilizadas em estufas, pois as altas temperaturas provocam alterações nas medidas de volume, induzindo o profissional ao erro durante a análise.

DESCONTAMINAÇÃO E DESCARTE DE RESÍDUOS CONTAMINADOS

O material resultando do experimento é altamente contaminado, esse material também inclui meio de cultura onde foi observado o crescimento microbiano. Todos os utensílios que tenham entrado em contato com microrganismos devem ser esterilizado em autoclave. Importante lembrar de afrouxar as tampas de todos os frascos com detergente para amolecer resíduos em pipetas e facilitar a remoção durante a etapa de lavagem.

ACONDICIONAMENTO

Placas de petri - devem ser acondicionadas em estojos de alumínio ou aço inoxidável ou embrulhadas em papel Kraft em grupos de até 10 placas.

Pipetas - preencher o bocal com algodão e acondicionar em porta pipetas com as pontas viradas para baixo.

Tubos de ensaios vazios - acondicionar em cestas apropriadas, cobrir a parte superior dos tubos com papel Kraft e amarrar com barbante.

Espátulas, pinças, tesouras e demais utensílios - embrulhar individualmente com papel Kraft, identificando a extremidade do embrulho que deve ser aberta no momento da análise.

REFERÊNCIA:

- Microbiologia Básica - Irineide Teixeira de Carvalho (UFRPE/CODAI 2010);